Définition:
* ELISA= Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay , littéralement ( dosage d’immunosorption liée à enzyme) c’est-à-dire dosage immunoenzymatique sur support solide.
* Dosage immunochimique qui utilise comme réactif l’anticorps pour doser l’antigène et inversement.
Principe:
La technique ELISA est une technique immuno-enzymatique de détection qui permet de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à une réaction colorée produite par l’action sur un substrat d’une enzyme préalablement fixée à l’anticorps
ELISA indirect
Les étapes de l’ELISA dit indirect, le plus couramment utilisé, pour déterminer la concentration en anticorps du sérum sont :
1. l’application d’un échantillon d’un antigène connu sur une surface, le plus souvent celle d’un puits d’une plaque de microtitration. L’antigène est fixé à la surface, de façon à le rendre immobile.
2. le recouvrement des puits (ou toute autre surface) par les échantillons de sérum à tester (ou tout autre solution à tester), dont la concentration en anticorps est, par définition, inconnue, et habituellement diluée dans le sérum d’une autre espèce. L’utilisation de sérum non-humain empêche la liaison à l’antigène par des anticorps non-spécifiques contenus dans le sang du patient.
3. le rinçage de la plaque, de façon à retirer les anticorps non-liés. Après rinçage, seuls les complexes antigène-anticorps demeurent attachés à la surface du puits.
4. l’ajout aux puits des anticorps secondaires, qui se lieront à tout complexe antigène-anticorps. Ces anticorps secondaires sont couplés à l’enzyme modificatrice de substrat qui permet de suivre l’évolution de la réaction.
5. le second rinçage de la plaque, de sorte à éliminer les anticorps non liés.
6. l’application d’un substrat qui, s’il est converti par l’enzyme, émet un signal chromogénique ou fluorescent.
7. la quantification du résultat, à la vue ou, le plus souvent, par spectrophotométrie ou tout autre appareil d’optique.
ELISA en sandwich
L’ELISA en sandwich est une variante moins commune (en clinique) de cette technique, utilisée afin de détecter un échantillon d’antigène dans le sérum ou tout autre échantillon. Cette technique est par contre d’un usage très courant en recherche.
Le procédé se déroule, dans ses grandes lignes, comme suit :
1. Une surface est préparée et une quantité connue d’anticorps dit de capture y est liée.
2. L’échantillon contenant l’antigène est appliqué à la plaque.
3. La plaque est rincée, de façon à éliminer l’antigène non-lié.
4. Les anticorps conjugués à l’enzyme sont ajoutés.
5. La plaque est rincée une seconde fois.
6. Le substrat convertible par l’enzyme en signal fluorescent est ajouté.
7. Le résultat est analysé “à l’œil” ou dans un spectrophotomètre spécialement conçu pour accepter directement les plaques de 96 puits
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